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新聞詳情
大鼠腫瘤組織選用單細(xì)胞懸液制備儀進(jìn)行研磨的關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)及實(shí)驗(yàn)效果
日期：2025-09-05 09:17
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摘要：在腫瘤**學(xué)領(lǐng)域，單細(xì)胞技術(shù)可以幫助科學(xué)家們更好地了解腫瘤細(xì)胞的生長和擴(kuò)散機(jī)制，以及**系統(tǒng)如何識別和攻擊腫瘤細(xì)胞。然而，組織樣本單細(xì)胞懸液制備是單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)中至關(guān)重要的工作，其質(zhì)量好壞直接影響了后續(xù)建庫的成敗以及測序數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量。因此，單細(xì)胞懸液制備除了需要有經(jīng)驗(yàn)豐富的人員來進(jìn)行指導(dǎo)/操作，還得依靠靠譜的單細(xì)胞懸液制備儀來助力。
在腫瘤**學(xué)領(lǐng)域，單細(xì)胞技術(shù)可以幫助科學(xué)家們更好地了解腫瘤細(xì)胞的生長和擴(kuò)散機(jī)制，以及**系統(tǒng)如何識別和攻擊腫瘤細(xì)胞。然而，組織樣本單細(xì)胞懸液制備是單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)中至關(guān)重要的工作，其質(zhì)量好壞直接影響了后續(xù)建庫的成敗以及測序數(shù)據(jù)產(chǎn)出質(zhì)量。因此，單細(xì)胞懸液制備除了需要有經(jīng)驗(yàn)豐富的人員來進(jìn)行指導(dǎo)/操作，還得依靠靠譜的單細(xì)胞懸液制備儀來助力。
一、實(shí)驗(yàn)設(shè)備
單細(xì)胞懸液制備儀
JX-CKSM-6WK
二、實(shí)驗(yàn)過程
01 組織獲取、清洗
1.荷瘤鼠麻醉后處死，取腫瘤組織200-500 mg，迅速置于裝有4 ℃不含血清的培養(yǎng)液或PBS的無菌培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放置冰上快速拿回實(shí)驗(yàn)室。(一小時內(nèi)分離腫瘤細(xì)胞)。
2.上述組織使用含有1 %雙抗的PBS洗滌三次，眼科剪去除組織塊中的脂肪、壞死組織等無用組織。
02 酶消化、機(jī)械分離
1.用剪刀將組織切割成1-2 mm3左右的小塊，用4℃ D-Hank's液洗1次，盡量去除剪碎組織過程中產(chǎn)生的組織碎片。
2.樣品管內(nèi)加入200-500 mg組織及消化酶，放入單細(xì)胞懸液儀，選擇內(nèi)置程序運(yùn)行。
3.消化完成后，適當(dāng)震蕩樣品管，觀察渾濁度與顏色，并用細(xì)胞篩過濾出單細(xì)胞懸液，隨后加入消化終止液，*終得到細(xì)胞懸液。
03 洗滌和重懸（選擇性去紅）
1.如有大量紅細(xì)胞污染，加入紅細(xì)胞裂解液（自備）裂紅，230-250 g離心后加入PBS重懸，隨即230-250 g離心洗滌并培養(yǎng)基重懸。
2.結(jié)果：單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保持95 %以上活率（PI染色流式或臺盼藍(lán)染色鏡檢），總數(shù)目在3×107左右。
操作流程圖
三、樣品前后對比
樣品研磨前效果圖
樣品研磨后效果圖
實(shí)驗(yàn)解決的問題
從組織獲得存活單細(xì)胞是一個復(fù)雜過程，處理當(dāng)中常存在處理時間長、細(xì)胞處于逆境狀態(tài)時間長、細(xì)胞得率低、細(xì)胞存活率低、操作繁瑣等問題。使用JX-CKSM-WK系列單細(xì)胞懸液制備儀，具有起始組織量小，時間短，細(xì)胞得率高，細(xì)胞活性高的特點(diǎn)。常應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)。
